Ход работы. Берут кровь из вены или из капилляра пальца. К счетной камере притирают покровное стекло до появления ньютоновских колец и рассматривают сетку под микроскопом. В центрифужную пробирку набирают 4 мл 3% раствора NaCl. Пипеткой от гемометра Сали или другой берут 20 мм3 крови и, обтерев кончик ее ватой, быстро выдувают кровь в пробирку. Не вынимая пипетки из раствора, споласкивают ее раствором. После этого содержимое пробирки перемешивают. Затем разбавленной кровью заполняют подготовленную счетную камеру. Заполнив камеру, ставят ее под микроскоп и считают эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, по диагонали (слева сверху, вправо вниз). Подсчет ведут в затемненном поле зрения (окуляр ´ 7, объектив ´ 40). Подсчитывают все эритроциты внутри квадрата и на верхней и левой его сторонах (правило Егорова).
Затем определяют количество эритроцитов в 1 мкл по формуле:
, где
X – искомое число эритроцитов;
Э – число эритроцитов в 5 больших квадратах;
200 – разведение крови;
4000 – учитывая, что объем камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм3, для определения числа эритроцитов в 1 мкл умножают найденное число на 4000;
80 – число маленьких квадратов в 5 больших.
Эта формула после сокращения упрощается доХ=Э 1010/л.
Рекомендации к оформлению работы. В результатах укажите число эритроцитов в 1 мкл и 1 л исследуемой крови, а также определите пределы колебаний и средние показатели числа эритроцитов для юношей и девушек. В анализе сравните их с нормальными показателями.
Работа 3. Определение гемоглобина по Сали
Ход работы. В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 н р-р HCl до нижней метки. Пипеткой берут 20 мм3 крови и выдувают на дно пробирки, чтобы верхний слой остался неокрашенным. Не вынимая пипетки из кислоты, ополаскивают ее. Затем содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по дну пробирки, и оставляют на 5-10 минут. За это время образуется солянокислый гемин. В дальнейшем, добавляя по капле дистиллированной воды, доводят цвет содержимого пробирки до цвета жидкости в боковых пробирках гемометра. По нижнему мениску жидкости в средней пробирке отмечают содержание гемоглобина в г % или г/л.
Рекомендации к оформлению работы. В результатах работы запишите количество гемоглобина в исследуемой крови. В анализе сравните этот показатель с нормой и объясните, почему разбавление производят дистиллированной водой.
Работа 4. Расчет цветового показателя
Ход работы.Цветовой показатель вычисляют по формуле:
Рекомендации к оформлению работы. Подставьте в формулу полученные Вами в предыдущих работах показатели содержания гемоглобина и числа эритроцитов и сравните полученный ЦП с нормой.
Работа 5. Определение гематокритного числа
Ход работы. Гематокритные капилляры – это стеклянные трубочки, разделенные на 100 равных частей. Их промывают цитратом и заполняют кровью. Затем центрифугируют в клинической центрифуге при 3000 об/мин в течение 30 мин, а в угловой – при 8000 об/мин в течение 15 мин. После центрифугирования в 1-ом случае форменные элементы оседают на дно, а во втором – отбрасываются от центра на периферию капилляров.
Рекомендации к оформлению работы. В результатах укажите длину столбика форменных элементов, в анализе сравните полученное число с нормой.
Занятие 2
ФИЗИОЛОГИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ
Цель занятия. Изучить функции лейкоцитов, их образование и регуляцию лейкопоэза.
Примерные вопросы для самоподготовки
1. Лейкоциты, их количество и основные группы. Методы определения числа лейкоцитов.
2. Лейкоформула и ее значение.
3. Лейкоцитоз и его виды. Лейкопения.
4. Функции гранулоцитов, регуляция их образования.
5. Функции агранулоцитов, регуляция их продукции. Мононуклеарно-фагоцитарная система.
6. Механизмы защиты клеточного гомеостаза. Неспецифическая резистентность, ее механизмы.
7. Иммунитет, его механизмы. Иммунный ответ.
8. Иммунологический надзор и иммунологическая толерантность.
9. Регуляция иммунитета. Иммунная регуляторная система.
10. Возрастные особенности физиологии лейкоцитов.
ЛЕЙКОЦИТЫ
Лейкоциты, или белые кровяные тельца, – истинные клетки крови. Они содержат ядро и органеллы.
По своему строению их делят на две группы: гранулоциты и агранулоциты.
Гранулоциты – лейкоциты, в цитоплазме которых содержится зернистость. К гранулоцитам относятся: нейтрофилы, эозинофилы и базофилы. Гранулоциты вырабатываются в красном костном мозге.
Агранулоциты – лейкоциты, цитоплазма которых гомогенна и не содержит зернистости. К агранулоцитам относятся: моноциты, лимфоциты, плазматические клетки. Продукция, дифференцировка и функционирование лимфоцитов происходит в лимфоидных органах: костном мозге, эмбриональной печени, вилочковой железе, лимфатических узлах, селезенке и крови. Моноциты образуются в красном костном мозге.
В кровотоке имеются два пула лейкоцитов: 1 – клетки, свободно циркулирующие в крови; 2 – клетки, занимающие краевое положение в сосудах и не участвующие в циркуляции (пристеночные, или депонированные). Это подразделение является функциональным, поскольку между циркулирующими и краевыми клетками существуют динамическое равновесие и постоянный обмен. При изменении физиологического состояния организма взаимоотношения между лейкоцитами этих пул изменяются.
В 1 л крови здорового человека содержится 4-9 ×109 лейкоцитов. Процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов называют лейкоцитарной формулой, или лейкограммой.
Лейкоформула (в %)
Число лейкоцитов в 1 л | Гранулоциты | Агранулоциты | |||||||
Нейтрофилы | Эозино- филы | Базо- филы | Лимфоциты | Моноциты | |||||
М | ю | п | с | ||||||
4-9 ×109 | 0-1 | 1-5 | 45-70 | 1-5 | 0,5-1 | 25-38 | 2-9 |
У здоровых людей она постоянна, а ее изменение – признак различных заболеваний.
Лейкоцитозы и лейкопении
Лейкоциты – одна из самых реактивных систем организма, поэтому их количество и качество изменяются при самых различных воздействиях. Общее увеличение числа лейкоцитов называют лейкоцитозом, а уменьшение – лейкопенией. Лейкоцитозы могут быть физиологическими и патологическими (истинными).
Физиологические лейкоцитозы развиваются у здоровых людей. Они имеют общие признаки:
1 – стабильность лейкоцитарной формулы;
2 – число лейкоцитов увеличивается не столь резко;
3 – имеют перераспределительный характер, обусловленный перераспределением лейкоцитов между сосудами разных органов и тканей, а также их раздепонированием;
4 – кратковременность;
5 – не изменяется функциональная активность лейкоцитов.