Микробиология №4.3.
Чем вирусы отличаются от всех остальных живых организмов?
1.Вирусы содержат нуклеиновую кислоту только одного типа – ДНК или РНК. Все другие организмы содержат нуклеиновые кислоты обоих типов.
2. Воспроизведение вирусов осуществляется из одной их нуклеиновой кислоты, в то время как прочие организмы репродуцируются из совокупности своих составных частей.
3.Вирусы неспособны к росту и бинарному делению.
4. У вирусов отсутствуют собственные энергообразующие системы.
5. У вирусов нет собственных белоксинтезирующих систем. Отсутствие у вирусов собственных энергообразующих и белоксинтезирующей систем характеризует их как абсолютных внутриклеточных паразитов.
6.Ультрамикроскопические размеры.
Что такое вирион, капсид, нуклеокапсид, тип симметрии, суперкапсид?
Вирион – это зрелая вирусная частица; конечная стадия развития вируса; форма внеклеточного существования вируса.
Капсид – это белковая оболочка, которая окружает геномную нуклеиновую кислоту (НК) вируса. Состоит из капсомеров.
Нуклеокапсид = капсид + нуклеиновая кислота
Тип симметрии – это способ пространственной упаковки капсомеров относительно НК и друг друга.
Суперкапсид – это наружная оболочка сложно организованных вирусов, состоящая из цитоплазматической мембраны хозяйской клетки, захваченной вирусом при сборке, со встроенными в нее вирусоспецифическими белками и гликопротеидами.
Критерии классификации вирусов.
Типы вирусных геномов.
РНК-геномы
1. Одноцепочечная нефрагментированная РНК, обладающая матричной активностью (позитивная, или +РНК). Вирус полиомиелита и другие пикорнавирусы.
2. Одноцепочечная нефрагментированная РНК, не обладающая матричной активностью (негативная, или -РНК). Вирион имеет в своем составе фермент НК-зависимую РНК-полимеразу, называемую транскриптазой. Она синтезирует на вирионной РНК матричную РНК, необходимую для трансляции вирусспецифи-ческих белков. Парамиксовирусы, рабдовирусы и др.
3. Одноцепочечная фрагментированная РНК, не обладающая матричной активностью (негативная РНК); вирион имеет транскриптазу. Ортомиксовирусы (РНК вириона состоит из 8 фрагментов).
4. Двухцепочечная фрагментированная РНК; вирион имеет транскриптазу. Рео-вирусы (10 фрагментов).
5. Вирусы, геном которых представлен двумя идентичными нитями позитивной РНК (диплоидный геном). Вирионы имеют ферментобратную транскриптазу. Ретровирусы.
6. Одноцепочечная кольцевая РНК. Такой геном имеет только один вирус — вирус дельта-гепатита. Это дефектный вирус, для размножения его необходим вирус-помощник (вирус гепатита В).
ДНК-геномы
1. Одноцепочечная линейная ДНК. Парвовирусы: «+» и «—» нити находятся в разных вирионах, но транскрибируется только «—» нить.
2. Одноцепочечная кольцевая ДНК. Фаги М13, 0X174.
3. Двухцепочечная линейная ДНК. Вирусы герпеса и др.; ранняя мРНК синтезируется в ядре клеточным ферментом.
4. Двухцепочечная кольцевая ДНК. Паповавирусы, вирус гепатита В и др.; ранняя мРНК синтезируется в ядре клеточным ферментом.
5. Двухцепочечная ДНК с ковалентно связанным терминальным гидрофобным белком. Аденовирусы; ранняя мРНК синтезируется клеточным ферментом в ядре.
6. Двухцепочечная ДНК, замкнутая на каждом конце ковалентной связью. Вирус оспы; размножение происходит в цитоплазме, ранняя мРНК синтезируется вирусным ферментом.
Методы культивирования вирусов.
1) Заражение лабораторных животных;
2) Заражение куриных эмбрионов;
3) Заражение культур тканей (клеток);
Типы клеток:
I. Суспензии клеток
II. Однослойные культуры клеток:
1.Первично-трипсинизированная культура тканей – взвесь клеток, полученная путём обработки тканей протеолитическими ферментами (трипсин, папаин и др.). Трипсинизацией достигается разделение клеток за счет переваривания межклеточного вещества. Такие клетки, помещенные в питательную среду, растут в виде монослоя и дают однослойную культуру ткани. Первично-трипсинизированная культура ткани выдерживает несколько пересевов, а затем погибает.
2. Перевиваемые (переживающие) клетки – культура клеток, сохраняющая способность к размножении вне организма неопределенно длительное время.
III. Штамм диплоидных клеток (для вакцин)
Использую эмбриональные ткани и ткани злокачественных новообразований.
Методы обнаружения вируса в культуре клеток.
1. Цитопатический эффект.
2. Реакция гемадсорбции.
3. Метод цветных проб.
4. Метод бляшек.
5. Иммунофлуоресцентный метод.
6. Реакция связывания комплемента.
7. Реакция гемагглютинации.
8. Заражение животных, восприимчивых к данному вирусу.
9. Реакция преципитации в агаре.
Методы типирования вирусов.
Определение типа вирусов в вируссодержащем материале основано на реакции нейтрализации биологического действия вируса (РНБД) типоспецифическими сыворотками. Конечный результат реакции может быть установлен на основании следующих признаков:
1) нейтрализация ЦПД;
2) нейтрализация реакции гемадсорбции;
3) цветная проба;
4) задержка (торможение) гемагглютинации;
5) свечение клеток, содержащих вирус, под влиянием типоспецифических флуоресци-рующих сывороток;
6) нейтрализация в опыте на животных.
Сущность метода бляшек.
Метод бляшек предложен Р. Дюльбекко для получения изолированных колоний вируса. В основе метода лежит появление в монослое зараженных вирусом клеток обесцвеченных участков, состоящих из дегенерированных клеток. Эти участки, получившие название бляшек, представляют собой колонии вируса, образующегося из одной вирусной частицы.
Метод заключается в следующем. В специальном флаконе на стенке выращивают монослой клеток, затем удаляют питательную среду. Клетки заражают вирусом и заливают агаром, содержащим индикатор нейтральный красный. Там, где происходит рост клеток, среда изменится в кислую сторону, и индикатор окрасится в розовый цвет. На тех участках, где клетки погибли под действием вируса, рН среды и, следовательно, цвет индикатора не изменяется. Такие островки неокрашенной среды имеют вид беловатых бляшек разной формы и величины, что зависит от вида вируса.
Типы вирусных инфекций.
Взаимодействие вирусов с клеткой может протекать по-разному и приводить к различным клиническим проявлениям. В зависимости от продолжительности пребывания вируса в организме различают 2 группы вирусных инфекций:
1) вирусные инфекции, связанные с непродолжительным пребыванием вируса в организме.В данном случае заболевание протекает в форме острой инфекции,либо в виде бессимптомной (инаппарантной).Острая инфекция, как правило заканчивается выздоровлением, формированием приобретённого иммунитета и освобождением организма от возбудителя. Бессимптомная инфекция протекает без каких- либо проявлений и заканчивается также формированием приобретённого иммунитета и освобождением организма от возбудителя.
2) Вирусные инфекции, обусловленные длительным пребыванием (персистенцией) возбудителя в организме.Они подразделяются на латентные, хронические и медленные. Латентные инфекциипротекают бессимптомно и могут сопровождаться либо нормальной репродукцией вируса во внешне здоровом организме и выделением его во внешнюю среду, либо сопровождаться вирусоносительством, при котором нарушен нормальный цикл вируснойрепродукции и вирус длительно персистирует в организме.
Хронические инфекции характеризуются периодическими состояниями выздоровления (ремиссии) и рецидивов (обострений).
Медленные инфекции характеризуют вирусные заболевания с продолжительным течением (иногда в течение многих лет) инкубационного периода, длительным прогрессирующим течением и заканчивающиеся тяжелыми расстройствами или чаще смертью. Типичным примером медленной инфекции является СПИД. В основе развития медленной инфекции лежат нарушения генетических, иммунологических и физиологических механизмов. Медленные инфекции могут вызывать и такие вирусы, которые обычно вызывают острые инфекции ( например вирусы кори, бешенства и другие). Так вирус кори оказался возбудителем такой тяжёлой медленной инфекции, как подострый склерозирующий панэнцефалит. Известны несколько механизмов, которые обуславливают длительное нахождение вируса в организме:
1) вирус находится в дефектном состоянии, он неспособен размножаться и индуцировать эффективный иммунный ответ;
2) вирус находится в клетке в виде свободной геномной нуклеиновой кислоты, недоступной действию антител.
3) геном вируса интегрирован в хромосому клетки- мишени.
Что такое вирогения?
Вирогения – внедрение вирусного генома в геном животной клетки.
Основные классы плазмид.
| КЛАСС | ФУНКЦИЯ |
| F-плазмиды | Донорные функции |
| R-плазмиды | Устойчивость к лекарственным препаратам |
| Col-плазмиды | Синтез колицинов |
| Ent-плазмиды | Синтез энтеротоксинов и факторов адгезии |
| Hly-плазмиды | Синтез гемолизинов |
| Биодеградативные | Разрушение различных органических соединений |
| Криптические | Функции неизвестны |
Что такое фаготипирование?
Фаготипирование –определение принадлежности выделенного бактериального штамма к тому или иному фаготипу. Микробы можно типировать путем изучения свойств их умеренных фагов и по чувствительности к набору специфических бактериофагов.
Применяется, как правило, в интересах эпидемиологического анализа и диагностики инфекционных заболеваний
Микробиология №4.3.
Чем вирусы отличаются от всех остальных живых организмов?
1.Вирусы содержат нуклеиновую кислоту только одного типа – ДНК или РНК. Все другие организмы содержат нуклеиновые кислоты обоих типов.
2. Воспроизведение вирусов осуществляется из одной их нуклеиновой кислоты, в то время как прочие организмы репродуцируются из совокупности своих составных частей.
3.Вирусы неспособны к росту и бинарному делению.
4. У вирусов отсутствуют собственные энергообразующие системы.
5. У вирусов нет собственных белоксинтезирующих систем. Отсутствие у вирусов собственных энергообразующих и белоксинтезирующей систем характеризует их как абсолютных внутриклеточных паразитов.
6.Ультрамикроскопические размеры.