1. Бесцветные или желтоватые аморфные вещества без четкой температуры плавления (в кристаллическом виде получены сапонины, которые имеют в своем составе до 4 моносахаридных остатков).
2. Сапонины обладают высокой поверхностной активностью. Это обусловлено наличием как гидрофильных, так и гидрофобных остатков в молекуле. (Водные растворы их при встряхивании образуют густую пену, так как понижают поверхностное натяжение жидкости).
3. Водные растворы стероидных сапонинов имеют нейтральные рН среды.
4. Тритерпеновые гликозиды бывают нейтральными и кислыми (последнее обусловлено наличием карбоксильной группы в агликоне или присутствием уроновых кислот в углеводной цепи).
5. Практически не растворимы в органических растворителях (хлороформ, бензол, диэтиловый эфир, петролейный эфир, ацетон).
6. Растворимы в 50% - 70% растворах этилового или метилового спирта и в горячих концентрированных спиртах.
7. Тритерпеновые сапонины с 1 – 4 моносахаридными остатками обычно плохо растворимы в воде. Растворимость в воде повышается с увеличением сахарных остатков в молекуле сапонина.
8. Оптически активные вещества.
9. Легко гидролизуются ферментами и кислотами. Для тритерпеновых гликозидов, имеющих О – ацилгликозидные связи, возможен щелочной гидролиз.
10. Вызывают гемолиз эритроцитов (сапонины образуют комплексы с холестеролом мембран эритроцитов, их липидная оболочка растворяется, и гемоглобин из эритроцитов переходит в плазму крови, делая ее ярко-красной и прозрачной «лаковая кровь»). Сапогенины не проявляют гемолитическую активность.
11. Токсичны для холоднокровных (сапонины, образуя комплекс с белками жаберного аппарата, вызывают нарушение его функционирования и, как следствие, гибель рыб).
12. Многие сапонины способны образовывать комплексы с фенолами, липидами, белками, высшими спиртами и стеринами.
13. Кислые тритерпеновые сапонины образуют комплексы с солями Pb, Cu, гидрооксидами Ва, Мg; Образуют окрашенные продукты (полиены) с кислотными реагентами (концентрированная кислота серная, уксусные ангидрид, сурьма треххлористая, кислота фосфорно-молибденовая и др.)
Кроме того, сапонины способны образовывать устойчивые комплексы между собой и с другими природными соединениями, поэтому их физико-химические свойства могут изменяться в широких пределах.
Методы выделения сапонинов из лекарственного растительного сырья
Выделение сапонинов из растительного сырья включает следующие стадии:
1 стадия. Получение суммарной фракции сапонинов
Экстрагируют сапонины из сырья обычно полярными растворителями:
- метанолом или этанолом различной концентрации (50%-70%);
- водой;
- 0,9% раствором хлорида натрия;
- водным раствором аммиака.
!(Сырье предварительно обезжиривают петролейным или диэтиловым эфиром, гексаном, трихлорметаном, метиленхлоридом. Необходимость этой операции связана с удалением из растительного сырья жироподобных веществ, прежде всего стеринов, с которыми большинство гликозидов способны образовывать нерастворимые в водных спиртах комплексные соединения)
2 стадия. Очистка его от сопутствующих веществ
а) сапониновые фракции очищают переосаждением:
· c помощью свойства сапонинов хорошо растворяться в горячих концентрированных спиртах, и выпадать в осадок – при охлаждении спирта;
· основаны на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с бария гидрооксидом или свинца ацетатом, комплексы с холестеролом, таннидами, белками. Полученные соли разлагают кислотой серной, холестероловые комплексы разрушают экстрагированием холестерина бензолом или эфиром, таниновые – экстоакцией водной суспензии цинка оксида, белковые – экстракцией сапонинов полярными органическими растворителями.
б) сапониновые фракции очищают гельфильтрацией или хроматографическими методами.
3 стадия. Разделение суммы сапонинов на индивидуальные гликозиды.
При выделении и разделении сапонинов методом колоночной хроматографии в качестве сорбента используют оксид алюминия, силикагель, активированный уголь, полиамид.
Методы качественного анализа сапонинов
Для обнаружения сапонинов в извлечении из растительного сырья пользуются реакциями, основанными на физических, химических и биологических свойствах этих веществ.
физические методы анализа: | химические реакции: (цветные и осадочные) | биологические методы анализа: |
- проба на пенообразование, - определение угла вращения | - реакция Либермана-Бурхарда (для стероидных сапонинов); - проба Лафона; - реакция Сальковского; - реакция Санье; - реакции осаждения (с холестерином, солями бария и магния, с солями меди, ацетатом свинца) | - гемолитический индекс, - рыбный индекс |
Методы количественного определения сапонинов в сырье
Для количественного определения сапонинов в растительном сырье применяют следующие методы:
1) Биологические методы, основанные на биологических свойствах сапонинов (определение гемолитического, рыбьего индексов).
Гемолитический индекс (HI) - это наименьшая концентрация извлечения из сырья, которая вызывает полный гемолиз эритроцитов, рассчитанная на единицу исследуемого вещества.
Из настоя растительного сырья на изотоническом растворе (0,9% раствор NaCl) в концентрации 1:10 готовят ряд разведений различной концентрации, затем к каждому разведению добавляют по 1 мл взвеси эритроцитов (2% свежей дефебринированной бараньей крови в изотоническом растворе) и встряхивают. Через определенное время (через сутки) наблюдают результаты гемолиза и рассчитывают результат.
Недостатки:
· Различные сапонины при одинаковой концентрации имеют разный гемолитический индекс;
· Положительный результат гемолитической пробы еще не является доказательством наличия сапонинов, т. к. гемолиз дают и другие растительные вещества (например, эфирные масла, кислоты, спирты)
· Сапонины могут находиться в растении в комплексе со стеролами и не проявлять гемолитической активности до разрушения этого комплекса.
2) Физический метод, основанный на физических свойствах сапонинов (определение пенного числа).
Пенное число – наименьшая концентрация сапонинов в извлечении, вызывающая образование стойкой пены в течение 1 мин.
3) Физико-химические методы: Общих физико-химических методов для определения содержания сапонинов не существует.
Применяют:
· гравиметрический метод (осаждение и взвешивание осадка);
· титрометрический (в том числе потенциометрическое титрование);
· колориметрический;
· спектрометрический.
ТЕМА 4: ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГО - АНАТОМИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩЕГО САПОНИНЫ
Цель занятия:
- изучить внешние признаки производящих растений, содержащих сапонины;
- изучить морфолого-анатомические признаки лекарственного растительного сырья, содержащего сапонины;
- изучить химический состав лекарственного растительного сырья;
- познакомиться с фармакологическим действием и медицинским применением лекарственных растений;
- научиться определять подлинность предложенного для анализа
- лекарственного растительного сырья по макро и микроскопическим признакам.
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ
1. Назовите морфолого-анатомические признаки семейств аралиевые, бобовые, хвощевые, диоскорейные, синюховые, парнолистниковые.
2. Используя учебные пособия, познакомьтесь с внешним видом, местами распространения и обитания, химическим составом, фармакологическим действием лекарственных растений предложенного списка.
3. Для закрепления знаний составьте таблицу.