Если свежие фекалии или другой материал исследовать на цисты простейших сразу нет возможности, их можно сохранять в течение двух суток при температуре несколько выше 0°С в чистых закрытых стеклянных, пластмассовых или парафиновых стаканчиках.
Для более продолжительного хранения применяют различные консерванты.
Метод консервации Сафаралиева. Состав консерванта Сафаралиева: метиленовый синий — 0,2 г, раствор сернокислого цинка 2% — 82,5 мл, формалин 40% — 10 мл, уксусная кислота крепкая — 5 мл, фенол кристаллический — 2,5 г. Реактивы смешивают в указанном порядке. Фенол предварительно расплавляют на водяной бане.
Консервантом наполняют стаканчики или бакпечатки емкостью 30 – 50 мл до половины объема. Подлежащие исследованию испражнения немедленно эмульгируются в отдельном для каждого больного стаканчике отдельной деревянной палочкой. Количество испражнений должно составлять примерно 1/3 объема консерванта. Простейшие окрашиваются уже через 5 – 10 минут и при необходимости могут сохраняться в течение нескольких месяцев.
Для исследования каплю осадка со дна пробирки с помощью пипетки помещают на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют при увеличении 80 или 400.
Консервировать можно как оформленный кал, так и жидкие патологические испражнения. В консерванте длительно сохраняются и хорошо окрашиваются как цисты, так и вегетативные формы амеб и других простейших.
Метод консервации Берроуза. Реактивы:
а) консервирующий раствор (хлорид натрия — 0,7 г, формалин 40% — 5,0 мл, спирт этиловый 96° — 12,5 мл, фенол кристаллический — 2,0 г, вода дистиллированная — до 100 мл);
б) красящий раствор (0,01% раствор тионина или азура, или 0,01% раствор метиленового синего).
Консервирование производится в растворе «а» таким же образом, как и в растворе Сафаралиева. Простейшие сохраняются в этом консерванте до одного месяца. Для микроско пического исследования каплю осадка эмульгируют в капле красящего раствора «б» на предметном стекле и покрывают покровным стеклом.
Для длительного хранения простейших используются также следующие консерванты: – 2% раствор бихромата калия (K2Cr2O7); – жидкость Барбагалло (3 мл 40% формалина и 97 мл физиологического раствора);
– мертиолят-йод-формалин (МИФ). Трофозоиты и цисты простейших сохраняются в МИФ до 6 месяцев.
При небольшой интенсивности инвазии, когда обнаружить простейших удается лишь при просмотре большого количества мазков, на что требуется очень много времени, применяют методы концентрации (обогащения) паразитов.
ПРИЛОЖЕНИЕ 2.
ИНСТРУКЦИЯ (14.01.97г № 13-4-2/819)
УТВЕРЖДАЮ
Зам. начальника Департамента ветеринарии
В.В. Селиверстов
О мероприятиях по борьбе со случной болезнью однокопытных
1. Общие положения.
Случная болезнь (дурина) инвазионная болезнь лошадей, ослов, мулов, вызываемая Trypanosoma equiperdum протекает преимущественно хронически.
Заражение животных происходит, в основном, половым путем, при искусствен-ном осеменении спермой, содержащей возбудителя, а также механическим - через предметы ухода, руки, различные инструменты (влагалищное зеркало, мочевой катетер, искусственная вагина.).
Заболевание животных случной болезнью наблюдают в любое время года. Болезнь характеризуется длительным (3-4 нед.) инкубационным периодом, появлением отеков половых органов, вымени, живота (отечный брус), язв, депигментацией кожи, бляшек, парезов, параличей губ, ушей и расстройством координации движения. При патологоанатомическом исследовании отмечают истощение, дегенеративные изменения в мышцах сердца, крупа и задних конечностей.
1.4. Диагноз на случную болезнь однокопытных устанавливают на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований (микроскопического, серологического).
1.5. В лабораторию для исследования на случную болезнь направляют соскобы с примесью крови из различных мест слизистой оболочки влагалища, мочеиспускательного канала, сперму, экссудат из надрезов отеков и бляшек.
Соскобы из различных мест слизистой оболочки уретры берут с помощью уретральной ложки. Для этого жеребца фиксируют и вводят внутримышечно в область крупа рометар в дозе 7,5 см3 на 100 кг массы тела. Через 7-10 мин вводят уретральную ложку на глубину 5-6 см и делают 3-4 возвратно-поступательных движения по стенке уретры. После чего уретральную ложку осторожно извлекают, опускают материал в пробирку с 2 см3 физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывают пробкой.
Сперму от жеребцов получают на искусственную вагину в хозяйстве, переливают в стерильные пробирки (флаконы) по 2см3 и закрывают пробками.
Соскобы со стенок влагалища берут уретральной ложкой через влагалищное зеркало. Материал опускают в пробирку с 2 см3 физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывают пробкой.
Экссудат из надрезов отеков и бляшек собирают шприцем, переносят в пробирку и закрывают пробкой.
1.6. Для серологического исследования направляют 1-2 см3 сыворотки крови, нативной или консервированной 5 %-ным раствором фенола (1 капля на 1см3 сыворотки) или сухой борной кислотой (2-4% к объему).
1.7. Отобранный патологический материал в пробирках, доставляют в лабораторию в термосе со льдом не позднее 4-х часов, сыворотку крови - не позднее 2 дней с момента взятия.
1.8 . Исследования биологического материала проводят согласно действующим методическим указаниям по лабораторным исследованиям на трипаносомозы лошадей, верблюдов, ослов, мулов и собак.
1.9. Результаты обследования лошадей.
1.9.1. Больными считают животных при наличии одного из следующих показателей: обнаружение трипаносом в мазках из исходного материала,
обнаружение характерных для случной болезни клинических признаков (бляшки, парезы, параличи губ, ушей, зада, характерная депигментация, отеки половых губ и др) при отрицательных результатах микроскопического и серологического исследований; получение положительного серологического исследования; получение дважды сомнительного серологического исследования.
1.9.2. Подозрительными по заболеванию считаются лошади:
имеющие неясные клинические признаки при отрицательных результатах серологических исследований,
бывшие в случке с больными;
давшие в РСК один раз сомнительный результат при трехкратном исследовании. Повторно на случную болезнь лошадей исследуют серологическим методом через 30 дн.
2. Мероприятия по предупреждению заболевания лошадей случной болезнью
2.1. В целях профилактики случной болезни необходимо:
- комплектовать коневодческие хозяйства (фермы) лошадьми из благополучных хозяйств-поставщиков;
- не допускать к случке племенных жеребцов с кобылами (конематками), не проверенными на случную болезнь в РСК;
- перед случкой клинически и серологически обследовать на случную болезнь племенных и пользовательных взрослых однокопытных животных дважды с интервалом 30 дней;
2.2. Животных, вновь поступивших из других хозяйств, содержат изолированно не менее 30 дней, подвергают тщательному клиническому осмотру, микроскопическому и серологическому исследованиям.
2.3. В случае выявления среди завезенных животных больных, положительно и сомнительно реагирующих в РСК, всю партию лошадей убивают.
2.4. На случных пунктах обслуживающий персонал при искусственном осеменении животных должен использовать одноразовые полиэтиленовые перчатки и пипетки. Инструменты, применяемые для отбора материала, дезинфицируют путем кипячения в течение 10-15 мин. Подставных кобыл (на которых получают сперму) в обязательном порядке обследуют на случную болезнь клинически и серологически.
2.5. Для получения спермы за каждым жеребцом закрепляют отдельную искусственную вагину.
2.6. Ректальное исследование кобыл проводят в перчатках разового применения.
3. Мероприятия, проводимые в неблагополучном хозяйстве.
3.1. При установлении диагноза хозяйство (ферму) объявляют неблагополучным по случной болезни и в нем решением администраций района вводят ограничения. При этом запрещают ввод в хозяйство и вывод из него лошадей, ослов, мулов для племенных и пользовательных целей, а также перегруппировку их внутри хозяйства.
3.2. Взрослое поголовье лошадей, ослов и их гибридов неблагополучного хозяйства подвергают клиническому, микроскопическому и серологическому исследованиям. Больных, положительно и дважды сомнительно реагирующих в РСК, животных убивают, а подозрительных по заболеванию случной болезнью содержат изолированно и вновь обследуют микроскопическим и серологическим методами с интервалом 30 дн до получения трехкратного отрицательного результата по группе.
3.3. В неблагополучных хозяйствах ведут точный учет жеребцов (ослов, мулов), кобыл, идущих в случку.
3.4. Мясо больных и положительно реагировавших животных перерабатывают в вареные колбасы согласно п. 5.1 действующих Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.
При истощении животного или обнаружении дистрофических изменений в мышечной ткани, мясо и внутренние органы направляют на утилизацию.
Шкуры от павших и вынужденно убитых больных животных выпускают без ограничений.
3.5. После каждого случая выделения зараженного животного и убоя его, а также перед снятием ограничений помещения, предметы ухода, оборудование считают от навоза, моют и подвергают дезинфекции одним из следующих препаратов: 2 %-ный раствор натра едкого, 2 %-ный раствор формалина, параформальдегида, 2 %-ный раствор хлорной извести, 5 %-ный раствор лизола из расчета 0,3-0.5 л/м2 площади. Раствор натра едкого применяют горячим (30-90°С).
3.6. Ограничения с неблагополучного хозяйства по случной болезни лошадей снимают через 2 года после последнего случая выделения клинически больного животного и получения ежегодно в течение этого периода отрицательных результатов серологических исследований.
3.7. После оздоровления хозяйства от случной болезни жеребцов-производителей и кобыл случного возраста ежегодно в течение 5 лет подвергают трехкратному серологическому исследованию за 3, 2 и 1 месяц до начала случной компании. Животных, давших положительную или дважды сомнительную реакции, убивают и поступаю согласно п. 3 настоящей инструкции.
С утверждением настоящей инструкции на территории Российской Федерации утрачивает силу « инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации случной болезни однокопытных», утвержденная Главным управлением ветеринарии Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам 12 ноября 1990 года.