Сырьевая база представлена как дикорастущими, так и культивируемыми лекарственными растениями. В диком виде встречаются:
- крушина ольховидная (к. ломкая), сем. крушиновые (Frangula alnus, Rhamnaceae) - образует крупные заросли в лесной зоне в подлеске сосновых, еловых и смешанных лесов, по берегам рек, озер, окраинам болот в европейской части страны, в Западной Сибири, на Кавказе.
- жостер слабительный (крушина слабительная), сем. крушиновые (Rhamnus cathartica, Rhamnaceae) - растет на лесных опушках, сухих лугах, на склонах гор в лесной (на юге), лесостепной и степной зонах в европейской части страны, в Западной Сибири, на Кавказе.
- зверобой продырявленный и з. пятнистый (з. четырехгранный), сем. зверобойные (Hypericum perforatum, H. maculatum (H. quadrangulum), Hypericaceae) - широко распространены в европейской части страны, в Западной и Восточной Сибири, на Кавказе, в горах Средней Азии. Растут в лесной и лесостепной зонах на суходольных лугах, лесных опушках и полянах.
- щавель конский, сем. гречишные (Rumex confertus, Polygonaceae) -произрастает по всей европейской части страны, в Сибири, на Дальнем Востоке, на Кавказе, в Казахстане в лесной и лесостепной зонах по берегам рек, обочинам дорог, на лесных полянах, лугах, по сорным местам на увлажненной почве.
- марена грузинская, сем. мареновые (Rubia iberica, Rubiaceae) - встречается на Кавказе и в Закавказье по берегам рек, оросительных каналов, в дубравах, среди кустарников и в садах.
С целью получения лекарственного сырья культивируются:
- кассия остролистная, сем. бобовые (Cassia acutifolia, Fabaceae). Родина - Восточная и Центральная Африка; для получения сырья возделывается в Казахстане и Туркмении.
- ревень дланевидный тангутский, сем. гречишные (Rheum palmatum var. tanguticum, Polygonaceae). Родина - юго-западный Китай; культивируется в Московской области.
- алоэ древовидное, сем. асфоделовые (Aloë arborescens, Asphodelaceae). Родина - Южная Африка; культивируется в Грузии (Аджария).
- марена красильная, сем. мареновые (Rubia tinctorum, Rubiaceae) - в небольших количествах культивируется на Северном Кавказе (Краснодарский край), на Украине, в Туркмении.
Заготовка, сушка и хранение сырья
Заготовку сырья проводят в период максимального накопления антраценпроизводных:
- кору крушины заготавливают весной в период активного сокодвижения. Перед использованием сырье необходимо выдержать в течение 1 года в обычных условиях или в течение 1 часа при 100-105 °С;
- траву зверобоя собирают в период цветения;
- листья сенны, листья и боковые побеги алоэ древовидного заготавливают в период вегетации (в течение лета);
- плоды жостера слабительного собирают в период плодоношения;
- корни ревеня, корни щавеля конского, корневища и корни марены заготавливают осенью (в период плодоношения), реже - ранней весной (в период начала вегетации).
Сушка естественная (воздушно-теневая) или искусственная (в сушилках при температуре 50-60 °С).
Хранят сырье в хорошо проветриваемых помещениях по общему списку в течение 3-5 лет.
Методы анализа лекарственного растительного сырья
Из сырья антраценпроизводные извлекают водой или спиртом различной концентрации.
Для получения свободных агликонов, антрагликозиды в растительном сырье подвергают гидролизу, свободные агликоны извлекают диэтиловым эфиром или хлороформом.
Для обнаружения антраценпроизводных в сырье используют качественные реакции и хроматографическое исследование.
Качественные реакции основаны на химических свойствах:
1. Реакция образования антрахинолятов со щелочью. Может быть проведена в трех вариантах:
а) на сухом сырье - при нанесении нескольких капель 5-10 % раствора натрия гидроксида на сырье появляется вишнево-красное пятно.
Положительный результат наблюдается, если антраценпроизводные присутствуют в окисленной форме. Рекомендована ГФ XI для подтверждения подлинности коры крушины.
б) с водным извлечением (1:10) - при добавлении к водному извлечению из сырья нескольких капель 5-10 % раствора щелочи образуется вишнево-красное окрашивание.
в) реакция Борнтрегера. Позволяет обнаружить эмодины в присутствии других производных антрацена.
Проба основана на способности антрагликозидов подвергаться щелочному гидролизу с образованием свободных агликонов. Одновременно происходит окисление восстановленных форм. После подкисления гидролизата агликоны извлекают эфиром. При встряхивании эфирного слоя с раствором аммиака эмодины переходят в водный слой, окрашивая его в вишнево-красный цвет. Хризофанол остается в органическом слое, окрашивая его в желтый цвет.
Предложена ГФ ХI для подтверждения подлинности коры крушины, листьев сенны, плодов жостера слабительного, корней ревеня, корневищ и корней марены. Содержащиеся в сырье марены производные ализарина окрашивают аммиачный слой в фиолетовый цвет.
2. Реакция микросублимации (микровозгонки).
Основана на способности антраценпроизводных возгоняться при 200 °С с последующей конденсацией на холодной поверхности без изменения основной структуры. Может быть проведена в двух вариантах: в пробирке и на предметном стекле. При нанесении на сублимат раствора натрия гидроксида образуется вишнево-красное (производные хризацина) или фиолетовое (производные ализарина) окрашивание.
Приводится в ГФ ХI для подтверждения подлинности коры крушины.
3. Реакция образования лаков.
Основана на способности антраценпроизводных образовывать со спиртовым раствором магния ацетата окрашенные комплексы.
Хроматографическое исследование.
Для идентификации антраценпроизводных в лекарственном растительном сырье используют бумажную хроматографию и хроматографию в тонком слое сорбента. Обнаруживают производные антрацена по характерной флуоресценции в УФ-свете.
Количественное определение.
Все методы количественного определения антраценпроизводных в сырье основаны на определении свободных агликонов после кислотного гидролиза. Агликоны экстрагируют в органический растворитель и определяют различными методами.
1. Фотоэлектроколориметрический метод.
Основан на способности окрашенных антрахинолятов поглощать монохроматический свет при длине волны 540 нм.
Предложен в 1957 г. Аутергоффом (Германия), модифицирован А.С. Романовой и А.И. Баньковским (НПО «ВИЛАР», 1965 г.).
Аутергофф предложил гидролиз и экстракцию агликонов объединить в одну стадию кипячением навески сырья с кислотой ледяной уксусной и последующей экстракцией диэтиловым эфиром.
Стадии определения:
1. Гидролиз антраценпроизводных и экстракция агликонов из сырья.
2. Получение окрашенных солей.
Эфирное извлечение обрабатывают в делительной воронке отдельными порциями щелочно-аммиачного раствора (5 % раствор натрия гидроксида, содержащий 2 % раствор аммиака). Антраценпроизводные в виде окрашенных антрахинолятов переходят в водную фазу; обрабатывают до тех пор, пока последняя порция щелочно-аммиачного раствора не будет оставаться бесцветной.
3. Окисление восстановленных форм антраценпроизводных.
Для перевода всех форм антраценпроизводных в окисленные, часть щелочно-аммиачного раствора антрахинолятов нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Восстановленные формы окисляются кислородом воздуха и вступают в реакцию со щелочно-аммиачным раствором, окраска становится интенсивнее.
4. Измерение оптической плотности окрашенных антрахинолятов с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК) при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр).
Содержание антраценпроизводных в сырье (%) рассчитывают по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду (CoCl2 · 6H2O), в пересчете на истизин.
Фотоэлектроколориметрический метод рекомендован ГФ XI для определения содержания антраценпроизводных в сырье крушины, ревеня, марены красильной.
2. Спектрофотометрический метод.
Этим методом определяют содержание антраценпроизводных в листьях сенны. Имеются особенности из-за структуры действующих веществ:
- экстракцию сеннозидов проводят водой при нагревании;
- водное извлечение очищают от смолистых веществ;
- окисление восстановленных форм проводят с помощью железа окисного хлорида (FeCl3);
- гидролиз гликозидов антрахинонов проводят 50 % раствором кислоты серной;
- оптическую плотность окрашенных антрахинолятов измеряют с помощью спектрофотометра при длине волны 523 нм;
- содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на хризофанол вычисляют по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду.