Для обнаружения сердечных гликозидов в растительных экстрактах используют цветные реакции, которые можно разделить на три группы:
| Реакции на углеводную часть молекулы (на дезоксисахара) | Реакции на стероидное ядро | Реакция на ненасыщенное лактонное кольцо (пятичленное) |
| - Реакция Келлера-Килиани | -реакция Либермана-Бурхарда; -реакция Розенгейма | -Реакция Легаля (с нитропруссидом натрия) -Реакция Раймонда (с м-динитробензолом) -Реакция Балье (с пикриновой кислотой) -Реакция Кедде (с 3,5-динитробензойной кислотой) |
В анализе сердечных гликозидов используют также УФ-, ИК-, спектроскопию.
Количественное определение сердечных гликозидов в лекарственном растительном сырье
Методы, которыми пользуются для количественного определения кардиогликозидов можно разделить на 2 группы.
Физико-химические методы
Наиболее простыми и доступными считаются фотометрические методы: фотокалориметрия и спектрофотометрия в видимой области спектра. Эти методы основаны на цветных реакциях сердечных гликозидов с различными нитросоединениями.
Флуориметрические методы основаны на способности сердечных гликозидов флуоресцировать под действием сильных кислот концентрированные серная, фосфорная кислоты и окислителей (перхлорат железа, хлорное железо) после кратковременного облучения УФ светом.
Поляграфические методы основаны на способности сердечных гликозидов восстанавливаться на ртутно-капельном электроде при потенциалах 1,9-2 В, образуя диффузные токи, волны которых пропорциональны концентрации сердечных гликозидов.
В последнее время все чаще применяется метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ)
Биологические методы
Нормативно-техническая документация на лекарственное растительное сырье наряду с физическими методами количественного определения требует обязательной стандартизации сырья биологическими методами.
Биологическая стандартизация проводится на животных: лягушках, кошках, голубях. Этот метод основан на способности сердечных гликозидов вызывать в токсических дозах систолическую остановку сердца.
Одна лягушачья единица действия (ЛЕД) соответствует наименьшей дозе стандартного препарата, вызывающей систолическую остановку сердца стандартной лягушки (лягушка-самец массой 28-33 г) Под одной кошачьей или голубиной единицей действия (1 КЕД или 1 ГЕД) подразумевают дозу стандартного препарата, вызывающей систолическую остановку сердца из расчета на 1 кг массы животного.
В НТД на лекарственное сырьё, содержащее сердечные гликозиды, обязательно указывают валор.
Валор сырья - это количество единиц действия в 1 г сырья. Для этого устанавливают наименьшие дозы стандартного образца и испытуемого препарата, вызывающие систолическую остановку сердца у животных. Затем рассчитывают содержание единиц в 1 г испытуемого лекарственного растения.
Ни один из вышеперечисленных методов количественного определения сердечных гликозидов не является идеальным. Количественное определение таких лабильных веществ, сердечные гликозиды, нуждается в индивидуальном подходе в каждом конкретном случае.
ТЕМА 2: ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩЕГО СЕРДЕЧНЫЕ ГЛИКОЗИДЫ
Цель занятия: научиться определять подлинность и доброкачественность лекарственного сырья, содержащего сердечные гликозиды.
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ
1. Напишите латинские названия сырья, растения и семейства предложенных для изучения растений.
2. Укажите места обитания и культивирования предложенных для изучения растений.
3. Перечислите основные сердечные гликозиды и другие классы БАВ предложенных для изучения растений.
4. Используя учебные пособия, перечислите основные морфологические признаки производящих растений.
5. Укажите правила сбора и сушки сырья. Как может изменяться биологическая активность сердечных гликозидов при сборе, сушке и хранении лекарственного сырья?
6. Перечислите фармакологические свойства, медицинское применение и препараты предложенных для изучения растений.
7. Для закрепления знаний заполните в лабораторном журнале таблицу:
| Лек. растение | Сердечные гликозиды | Химическая формула | Другие классы БАД, содержащиеся в ЛРС | Медицинское применение | Препараты |
Список лекарственных растений, содержащих кардиогликозиды
Лекарственные растения, содержащие карденолиды типа наперстянки
1. Digitalis purpurea(наперстянка пурпуровая).
Сем.: Scrophulariaceae (Норичниковые)
Сырье: Folia Digitalis
2. Digitalis grandiflora(наперстянка крупноцветковая).
Сем.: Scrophulariaceae (Норичниковые)
Сырье: Folia Digitalis
3. Digitalis lanata (наперстянка шерстистая)
Сем.: Scrophulariaceae (Норичниковые)
Сырье: Folia Digitalis lanatae
Лекарственные растения, содержащие карденолиды типа строфанта
4. Convallaria majalis (ландыш майский)
Сем.: Convallariaceae (Ландышевые)
Сырье: Folia Convallariae
Herba Convallariae
Floris Convallariae
5. Adonis vernalis (горицвет весенний)
Сем.: Ranunculaceae (Лютиковые).
Сырье: Herba Adonidis vernalis
6. Strophanthus kombe (строфант Комбе).
Сем.: Apocynaceae (Кутровые)
Сырье: Semina Strophanthi
7. Erysimum diffusum=Erysimum canescens
(желтушник раскидистый)=(желтушник седеющий)
Cем.: Brassicaceae (Крестоцветные)
Сырье: Herba Erysimi recens
Лекарственные растения, содержащие буфадиенолиды
8. Urginea maritime= Scilla maritime (морской лук)
Сем.: Liliaceae (Лилейные)
Сырье: Bulbus Scillae (Высушенные внутренние чешуи луковиц)
9. Helleborus purpurascens (Морозник краснеющий)
Сем.: Ranunculaceae (Лютиковые).
Сырье: Rhizomata cum radicibus Hellebori purpurascentis
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ
Задание 1. Изучение морфолого-анатомических признаков листьев наперстянки пурпурной
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму листовой пластинки;
· жилкование листовой пластинки;
· край листовой пластинки;
· характер опушения;
· особенность строения черешка у прикорневых листьев.
При описании микродиагностических признаков обратите внимание на:
· количество, характер и расположение простых волосков;
· типы головчатых волосков.
Задание 2. Изучение макродиагностических признаков листьев наперстянки крупноцветковой
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму листовой пластинки;
· жилкование листовой пластинки;
· край листовой пластинки;
· отсутствие опушения;
· особенность строения черешка.
Обратите внимание, что ГФ XI предусматривает использование наперстянки крупноцветковой только в цельном виде.
Задание 3. Изучение макродиагностических признаков листьев наперстянки шерстистой
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму и характер листовой пластинки (листья слегка кожистые);
· жилкование листовой пластинки и окраску жилок;
· край листовой пластинки;
· отсутствие опушения листовой пластинки;
· особенность строения черешка.
Задание 4. Сравнительная характеристика внешних признаков производящих растений и лекарственного растительного сырья различных видов наперстянок
На основании изучения морфологических признаков производящих растений и листьев наперстянок заполните предложенную таблицу
| Признак | D. purpurea | D.grandiflora | D. lanata |
| Жизненная форма | |||
| Форма листовой пластинки | |||
| Край листовой пластинки | |||
| Жилкование | |||
| Опушение листовой пластинки | |||
| Цвет листовой пластинки (верхней и нижней сторон) | |||
| Соцветие | |||
| Особенности строения цветка | |||
| Окраска венчика |
►Обратите внимание на другие виды наперстянок, разрешенных к использованию в медицинских целях.
Помимо упомянутых видов, разрешены к использованию наперстянка реснитчатая (Digitalis ciliata), от которой заготавливают траву и наперстянка ржавая (Digitalis ferruginea), сырьем которой являются листья.
►Обратите внимание на примеси.
Примесью к наперстянке пурпуровой, не подлежащей заготовке, является наперстянка испанская (Digitalis thapsi) дико произрастающая в Испании и Италии, имеющая листья от ланцетных до овальных с неравномерно-зубчатым краем до 15 см длиной и 5 см шириной.
Задание 5. Изучение морфолого-анатомических признаков листьев ландыша майского
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму листовой пластинки
· характер жилкования листовой пластинки;
· характер прикрепления листьев;
· особенность строения черешка.
· форму и особенность поверхности цветоносов;
· строение соцветия;
· строение цветка.
При описании микродиагностических признаков обратите внимание на:
· форму и расположение клеток эпидермиса;
· тип устичного аппарата;
· внешний вид полисадной ткани;
· наличие и характер кристаллических включений.
►В каких листьях накапливается большее количество действующих веществ?
►Рассмотрите сходные виды растений, которые являются примесью к лекарственному растительному сырью, и отметьте отличительные признаки.
Задание 6. Изучение макродиагностических признаков травы горицвета весеннего
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму и характер рассечения листовой пластинки;
· внешний вид долей листовой пластинки;
· строение цветка (количество чашелистиков, лепестков, тычинок и пестиков);
· особенность строения плода (сборный, из многочисленных орешков);
· внешний вид орешков (овальные с крючкообразно загнутым столбиком).
►Обратите внимание, что при заготовке растений стебли срезают выше коричневых чешуй. Почему?
►Почему горицвет весенний не удалось ввести в культуру?
Задание 7. Изучение макродиагностических признаков семян строфанта
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму семени, наличие шва на плоской стороне;
· наличие волосков на поверхности семени;
· цвет семени до и после стирания волосков.
Обратите внимание на следующие вопросы.
►Чему равен Валор семян строфанта?
►Как удовлетворяется потребность в семенах в нашей стране?
►Как виды строфанта еще используются в медицине?
►Как храниться растительное лекарственное сырье строфанта?
Задание 8. Изучение макродиагностических признаков травы желтушника раскидистого
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму стеблей и листорасположение;
· форму листовой пластинки, наличие черешка и характер края листа;
· тип соцветия и строение цветка;
· тип плода, фаза его зрелости;
· характер опушения растения.
Обратите внимание на следующие вопросы.
►В каком виде используется лекарственное сырье?
►Как скоро должно быть доставлено сырье на фармацевтическую фабрику?
Задание 9. Изучение лекарственного растительного сырья морского лука
Используя наглядные пособия, данные ГФ, учебных пособий, справочного материала изучите производящее растение и лекарственное растительное сырье по предложенному плану и оформите по схеме.
►Какие существуют разновидности морского лука? Какая разновидность используется в медицине как источник сердечных гликозидов?
При описании внешних признаков обратите внимание на:
· форму кусочков сырья;
· цвет высохших чешуй.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Русские и латинские названия производящих растений, семейств и лекарственного растительного сырья.
2. Ботаническая характеристика производящих растений.
3. Макро и микродиагностические признаки лекарственного растительного сырья.
4. Химический состав лекарственных растений.
5. Особенности сбора и сушки лекарственных растений, охранные мероприятия при заготовке лекарственного растительного сырья.
6. Условия хранения лекарственного растительного сырья.
7. Фармакологическое действие и лекарственные препараты.
СПРАВОЧНЫЙ МАТЕРИАЛ
Folia Digitalis
Digitalis purpurea (наперстянка пурпуровая)