1. Рассмотрите предложенные гербарные образцы и рисунки производящего растения. Отметьте морфологические особенности производящего растения.
2. Рассмотрите сырье, опишите его макроскопические признаки (смотри алгоритм описания внешних признаков сырья), обратите внимание на специфические особенности. Сравните это описание со стандартом, в фармакопейной статье. Зарисуйте в альбоме внешний вид лекарственного растения и лекарственного растительного сырья.
3. Приготовьте микропрепарат лекарственного растительного сырья. Рассмотрите его под микроскопом и зарисуйте в альбоме. Сделайте описание микропрепарата (смотри алгоритм описания микродиагностических признаков сырья) и отметьте характерные микродиагностические признаки. Сравните описание со стандартом.
4. Изучите возможные качественные реакции на данное ЛРС.
5. Укажите возможные примеси к данному лекарственному растительному сырью.
6. Запишите метод количественного определения эфирного масла и условия его проведения.
7. Используя ГФ, ознакомьтесь с числовыми показателями ЛРС.
8. Используя ГФ и учебные пособия, ознакомьтесь с особенностями заготовки, сушки, хранения ЛРС. Назовите основные районы заготовки ЛРС.
9. Укажите фармакологическое действие, медицинское применение и препараты ЛРС. Обратите внимание на противопоказания к применению ЛРС.
10. Результаты исследования оформите в виде предложенной схемы.
Схема для изучения лекарственного растительного сырья
| I. | Латинские | Русские |
| Название производящего растения | ||
| Семейство | ||
| Сырье |
Стандартизация
I. Внешние признаки лекарственного растительного сырья
| Признак | Описание | Рисунок |
| 1. | ||
| 2. | ||
| 3… |
II. Микродиагностические признаки лекарственного растительного сырья
| Рисунок | Описание |
III. Качественные реакции на растительное сырье
IV. Возможные примеси к лекарственному растительному сырью
V. Числовые показатели (для цельного сырья)
| Наименование показателя | Норма |
VI. Метод количественного определения действующих веществ
VII. Заготовка лекарственного растительного сырья
| Ресурсы | |
| Время заготовки | |
| Особенности заготовки, охранные мероприятия |
VIII. Хранение лекарственного растительного сырья
| Список хранения | |
| Особенности хранения. | |
| Срок годности |
IX. Фармакологическая группа
ТЕМА 1: КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩЕГО КАРДИОГЛИКОЗИДЫ
Цель занятия:
- изучить химическое строение и классификацию кардиогликозидов;
- познакомиться со свойствами кардиогликозидов и методами их выделения из лекарственного растительного сырья;
- научиться проводить качественные реакции, позволяющие подтвердить наличие кардиогликозидов в лекарственном растительном сырье;
- познакомиться с методами определения количественного содержания кардиогликозидов в лекарственном растительном сырье.
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ
1. Дайте определение понятия «сердечные гликозиды».
2. Перечислите классы и группы сердечных гликозидов.
3. Охарактеризуйте физико-химические свойства сердечных гликозидов.
4. Какие качественные реакции используются для обнаружения сердечных гликозидов в ЛРС?
5. Охарактеризуйте методы количественного определения сердечных гликозидов в ЛРС.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ
Задание 1. Приготовление извлечения из лекарственного растительного сырья
Выделите кардиогликозиды из предложенного образца лекарственного растительного сырья для проведения качественных реакций.
Методика
1. Отвесьте 1,0 г измельченного растительного сырья (по заданию преподавателя), поместите в колбу объемом 100 мл, прибавьте 20 мл 50% этанола и оставьте на 24 часа.
2. Прибавьте 10 мл 10% раствора ацетата свинца (для осаждения сопутствующих балластных веществ), и прокипятите полученную смесь в течение 2 минут на водяной бане и профильтруйте.
3. К полученному фильтрату прибавьте 10 мл хлороформа и перемешайте слои в течение 1-2 минут.
4. Полученный раствор центрифугируют. Верхний слой отбрасывают, а нижний хлороформный пропускают через фильтр, на который предварительно насыпан безводный натрия сульфат.
Полученное извлечение используют для качественного анализа.
Задание 2. Качественные реакции на сердечные гликозиды
Проведите качественные реакции обнаружения кардиогликозидов в образце сырья, полученном для анализа. Запишите свои наблюдения и сделайте вывод о содержании в ЛРС сердечных гликозидов.
| Реакции на углеводную часть молекул | ||
| 1. Реакция Келлера- Килиани | ||
| Реактив | Методика проведения опыта | Наблюдения |
| Готовят 2 раствора: 1-й раствор Ледяная уксусная кислота, содержащая следы Fe2(SO4)3 2-й раствор Концентрированная серная кислота также со следами Fe2(SO4)3. | 1 мл извлечения выпаривают на водяной бане. Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в 1 мл раствора 1, переливают в пробирку и осторожно по стенке пробирки вливают 1 мл раствора 2 | При наличии дезоксисахара на границе слоев появляется оранжевое (бурое) кольцо, а через некоторое время над этим кольцом появляется зелено-синее окрашивание |
| Реакции на стероидную часть кардиогликозидов | ||
| 2. Реакция Либермана-Бурхарда | ||
| Смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (50:1) | 1 мл извлечения выпаривают на водяной бане. Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют реактив | Через некоторое время развивается окраска от розовой к зелёной и синей |
| 3. Реакция Розенгейма | ||
| 90% спиртовой раствор трихлоруксусной кислоты | 1 мл извлечения выпаривают на водяной бане. Сухой остаток очищенного извлечения смешивают с реактивом | Появляются сменяющие друг друга окраски от розовой до лиловой и сине-зеленой |
| Реакции на пятичленное ненасыщенное лактонное кольцо Эти реакции основаны на способности пятичленного ненасыщенного кольца образовывать окрашенные комплексы в щелочной среде различными ароматическими нитропроизводными | ||
| 4. Реакция Балье | ||
| Свежеприготовленная смесь гидроксида натрия и пикриновой кислоты (среда раствора щелочная) | 1 мл извлечения выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 1 мл этанола. Полученный спиртовой раствор переливают в пробирку и добавляют 1 мл свежеприготовленного раствора пикрата натрия | Постепенно появляется оранжевое, розовое или красное окрашивание |
| 5. Реакция Легаля | ||
| Готовят 2 раствора: 1-й раствор: 5 % раствор нитропруссида натрия 2-й раствор: 10 % раствор едкого натра | 1 мл извлечения выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 1 мл этанола. Полученный спиртовой раствор переливают в пробирку и добавляют 1 мл раствора 1. Затем осторожно, не взбалтывая, по стенкам пробирки приливают 1 мл раствора 2 | В присутствии карденолидов появляется постепенно исчезающее красно-фиолетовое окрашивание в верхней части раствора |
Задание 3. Детектирование кардиогликозидов в УФ лучах
Проведите обнаружение сердечных гликозидов в извлечении из лекарственного растительного сырья с помощью УФ-спектроскопии. Запишите наблюдения и сделайте вывод.
Методика проведения опыта
К 1 мл извлечения прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты и через 20 минут наблюдают флюоресценцию в УФ лучах.
Задание 4.Количественное определение сердечных гликозидов
Проведите количественное определение сердечных гликозидов в препарате «Адонизид» из травы горицвета весеннего. Сделайте вывод о его доброкачественности.
Количественное определение кардиогликозидов адонизида
(ГФ Х, стр.61)
Методика.
1. 0,5 мл очищенного препарата адонизида (из травы горицвета весеннего) помещают в пробирку, прибавляют 1 мл нейтрального раствора пикрата натрия, 3 мл воды, 0,5 мл 2 % раствора едкого натра и перемешивают.
2. Через 10 мин определяют оптическую плотность раствора на фотоколориметре при λ=490-500 нм в кювете толщиной 10 мм.
3. В качестве контрольного раствора используют смесь, состоящую из 1 мл нейтрального раствора пикрата натрия, 0,5 мл 2% раствора гидроксида натрия, 3,5 мл воды.
4. Параллельно определяют оптическую плотность эталонного раствора.
Приготовление эталонного раствора: К 1 мл нейтрального раствора пикрата натрия прибавляют 0,5 мл очищенного нейтрального препарата (к препарату прибавляют 5-6 капель фенолфталеина и 0,1 н раствора едкого натра до изменения окраски), 2,2 мл 1% водно-глицеринового раствора сульфита натрия и 1,3 мл воды.
5. Содержание сердечных гликозидов в пересчете на цимарин в 1 мл препарата в миллиграммах вычисляют по формуле:
| D1 - оптическая плотность исследуемого раствора Do – оптическая плотность эталонного раствора а – содержание безводного сульфита натрия в эталонном растворе в миллиграммах, (в 2,2 мл содержится 11мг); 0,027 – количество цимарина, соответствующее 1 мг безводного сульфита натрия, в миллиграммах; |
1 ЛЕД соответствует 0,024 мг цимарина.
1 мл препарата должен содержать 0,55-0,65 мг цимарина , что соответствует 23-27 ЛЕД.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ К ИЗУЧАЕМОЙ ТЕМЕ
1. Дайте определение понятия «сердечные гликозиды».
2. Напишите формулу циклопентанпергидрофенантрена. Какую особенность в строении имеет это соединение у кардиогликозидов в отличие от других природных стероидов?
3. Расскажите о классификации кардиогликозидов в зависимости от строения лактонного кольца и заместителя стоящего при С10?
4. Чем обусловлено специфическое действие кардиогликозидов на сердечную мышцу?
5. Какие заместители могут встречаться в ядре циклопентанпергидрофенантрена в молекулах кардиогликозидов?
6. Как строение заместителей влияет на фармакологические свойства кардиогликозидов?
7. К какому углероду ядра циклопентанпергидрофенантрена присоединяется углеводный компонент?
8. Каким образом соединены сахара в молекуле кардиогликозида?
9. Какую характерную особенность имеют специфические сахара, входящие в состав кардиогликозидов? Напишите формулы дигитоксозы, циморозы, олеандрозы.
10. Какое влияние оказывают сахара, входящие в состав молекул на фармакологические свойства кардиогликозидов на их фармакологические свойства?
11. Какова зависимость между химическим строением и биологическими свойствами сердечных гликозидов.
12. Охарактеризуйте физико-химические свойства сердечных гликозидов.
13. Охарактеризуйте основные этапы выделения сердечных гликозидов из растительного сырья.
14. Перечислите качественные реакции на сердечные гликозиды. Охарактеризуйте методики проведения качественных реакций.
15. Какие физико-химические методы используются для количественного определения сердечных гликозидов? Охарактеризуйте методику определения цимарина в «Адонизиде».
16. Охарактеризуйте метод биологической стандартизации сердечных гликозидов. Что такое валор?
17. Напишите формулы сердечных гликозидов, содержащихся в изучаемых лекарственных растениях (виды наперстянок, ландыш, горицвет, строфант, морской лук, морозник)
СПРАВОЧНЫЙ МАТЕРИАЛ