Ионообменная хроматография

Ионообменная хроматография: берётся колонка с ионообменной смолой. Белки связываются со смолой за счёт ионных связей, сила которых будет зависеть от заряда белков и его плотности на поверхности молекулы. Белки можно последовательно снимать с колонки заменяя их на другие катионы или анионы, используя солевые растворы разной концентрации и pH. Гель фильтрация (метод разделения белков по молекулярной массе или метод молекулярного сита): в колонке зёрна из синтетического полисахарида – декстрана, который называется серфадекс, каждое зерно – сито, которое имеет упоры определённого диаметра. Можно разделить белки по размерам, больший белок выйдет первым. Аффинная хромотография (или посродству): колонка заполняется сефарозой, в которой химически зашито какое-то вещество, которое будет реагировать только с одним белком из смеси (с которым у нее будет сродство). К ферменту зашивают субстрат, к гормону – рецептор. Затем белок снимается с колонки подходящим буферным раствором. Метод помогает выделить белки высочайшей степени очистки. Ультрафильтрация: используется толстостенная металлическая ячейка. На дне сито с разным диаметром пор. Под давлением мелкие частицы (примеси) и жидкости уходят, а белок остаётся и концентрируется, обеззараживается. №7 В организме чела 50тыс. белков,отличающихся первичной струтрурой,конформацией,строением активного центра и функцями. Кроме того б различаются количеством амино-кт, из кот они построены. К глобулярным относ белки форма кот – эллипс. Они имеют компактную стр-ру и многие из них за счёт удаления гидрофобных радикалов внутрь хорошо р-римы в воде (глобин). Фибоиллярные белки имеют вытянутую нитевидную структуру. К ним относятся каллогены, эластин, керотин, вып в орг чел стр-рную ф-ю. Прстые белки содерж в своём составе только полипептидные цепи, сост из аминок-тных остатков. Сложные белки содерж помими полипептид цепей небелковую часть, присоед к белкут слабыми или ковалентными связями. Небелковая часть может быть представлена ионами Ме, к-либо орг молекулами и носит наз простетической группы. По сходству вып ф-ий белки можно раздеоить на группы: - ферменты (специализир белки, ускоряющие теч хим р-ий), - регуляторные белки (относятся к белковым гормонам, участвующие в поддержании гомеостаза), - рецепторные белки (сигнальные молекулы действуют на внутриклет процессы через взаимодейств с белками- рецепторами), - транспортные б (переносят специфич лиганды от одного органа к другому), стр-рные б (предают форму тканям, создают опору, опред мех св-ва), - защит б (узнают и связывают чужеродные молекулы, нейтрализуя их), - сократительные белки (при вып своих фи-й наделяют Кл способностью сокращатся и передвигаться). Белки, имеющие гомологичные участки полипептид цепи, сходную конформацию и родственные ф-и выд в сем-ва белков. Сериновые протеазы – семейство ф-тов, кот исп уникальный активированный остаток сериа, располож в актив центре, для связ и каталитич гидролиза апептид связей в б. Иммуноглобулины – специфические белки, вырабатываемые б-лимфоцитами в ответ на попадание.