Анаэробное дыхание – гликолиз.
Цепь реакций гликолиза можно условно разделить на 2 звена: в первом осуществляется осуществляется распад глюкозы на 2 триозы (подготовительная стадия), во втором – окисление триоз в пируват с восстановлением последнего в лактат (стадия гликолитической оксидоредукции).
1-я реакция:
Глюкоза Глюкозо-6-фосфат
Фосфорилирование глюкозы гексокиназой и глюкокиназой (о значении этих ферментов см. выше) – первая регулируемая реакция процесса гликолиза. Образующийся глюкозо-6-фосфат считается аллостерическим ингибитором гексокиназы (но не глюкокиназы).
Так как глюкокиназная реакция является инсулинзависимой, можно вместо глюкозы больным диабетом назначать фруктозу (фруктоза фосфорилируется гексокиназой сразу во фруктозо-6-фосфат).
2-я реакция:
Глюкозо-6-фосфат обратимо изомеризуется во фруктозо-6-фосфат ферментом фосфогексоизомеразой.
3-я реакция:
Здесь, как и в первой реакции, происходит значительное падение свободной энергии, поэтому она необратима.
Эта реакция является главной регулируемой реакцией гликолиза. Она катализируется аллостерическим ферментом – фосфофруктокиназой, имеющим сложную четвертичную структуру. Аллостерическими активаторами фосфо-фруктокиназы служат АМФ, АДФ, фруктозо-6-фосфат; аллостерическими ингибиторами – АТФ и цитрат. Следует отметить двоякую роль АТФ – вначале эта молекула используется как субстрат реакции, а затем, связываясь с аллостерическим центром фермента, – как аллостерический ингибитор. Увеличение соотношения АТФ/АМФ приводит к угнетению активности фосфофруктокиназы. Так, в неработающей мышце концентрация АТФ относительно высока и гликолиз заторможен. Во время работы АТФ расходуется и активность фосфофруктокиназы повышается, следовательно, процесс гликолиза активируется.
Как было установлено позже, важнейшим аллостерическим регулятором фосфофруктокиназы является фруктозо-2,6-дифосфат.
4-я реакция:
|
H
С ═ О
|
HСОH
│
СН2―О―РО3Н2
Фосфоглицериновый
Альдегид (3-ФГА)
4-я реакция обратима. Катализирующий её фермент называется альдолазой, так как расщепляется альдол – фруктозо-1,6-дифосфат. Равновесие реакции сдвинуто в сторону распада фруктозо-1,6-дифосфата, поскольку образующийся 3-ФГА расходуется в дальнейших реакциях гликолиза. Именно в силу последнего обратимая триозофосфатизомеразная реакция также смещается в сторону образования 3-ФГА.
Определение активности альдолазы используют в энзимодиагностике при заболеваниях, связанных с повреждением или гибелью клеток: так, при остром гепатите активность этого фермента может увеличиваться в 5-20 раз, при инфаркте миокарда – в 3-10 раз, при миодистрофии – в 4-10 раз.
Таким образом, в подготовительной стадии гликолиза фактически образуется 2 молекулы 3-ФГА.
Следующая стадия гликолиза – гликолитическая оксидоредукция – является более сложной.
5-я реакция.
В этой реакции 3-ФГА окисляется дегидрогеназой 3-фосфоглице-ринового альдегида. Фермент состоит из 4-х одинаковых субъединиц, в состав его активного центра входит SH-группа. Дегидрогеназа 3-ФГА нуждается также в коферменте НАД+.
Фермент окисляет свой субстрат (3-ФГА), перенося водород альдегидной группы 3-фосфоглицеринового альдегида на кофермент НАД+, который при этом восстанавливается в НАДН∙Н+ в присутствии неорганического фосфата. Выделяющейся при окислении 3-ФГА энергии достаточно для образования высокоэргического (т.е. заключающего в себе м а к р о э р г и ч е с к у ю связь) соединения – 1,3-дифосфоглицериновой кислоты (1,3-ДФГК).
Образование НАДН∙Н+ из окисленной формы этого кофермента осуществляется в ходе реакции связывания 3-ФГА с SH-группой активного центра фермента – дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида:
CH2O℗ CH2O℗ CH2O℗ CH2O℗
│ │ НАД+ НАДН∙Н+ │ │
CHOH CHOH CHOH CHOH
│ 1 │ 2 │ 3│
H―C═O H―C―OH C═O C═O
3-ФГА │ │ │
S S O
ДФГК
SH
6-я реакция.
Эта реакция получила название реакции субстратного фосфорилирования – фосфорилирование АДФ за счёт энергии макроэргического субстрата. Реакция сопровождается выделением значительного количества свободной энергии, поэтому её равновесие сдвину вправо. Она может стать обратимой при избытке 3-фосфоглицерата.
СН2О―РО3Н2 Mg2+ СН2О―РО3Н2
| фосфоглицераткиназа |
Н―С―ОН + АДФ АТФ + Н―С―ОН
| |
С═О С═О
О~ РО3Н2 ОН
ДФКГ 3-фосфоглицерат
Я реакция.
Изомеризация 3-фосфоглицерата в 2-фосфоглицерат:
СН2О―РО3Н2 СООН
| фосфоглицеромутаза |
Н―С―ОН + АДФ АТФ + Н―С―О―РО3Н2
| |
С═О СН2ОН
ОН